膠體金是種常用的標記，是以膠體金作為示蹤標志物應用于抗原抗體的種新型的免疫標記，有其的優(yōu)點。近年已在各種生物學研究中廣泛使用。在臨床使用的免疫印跡幾乎都使用其標記。同時在式、電鏡、免疫、分子生物學以至生物芯片中都可能例用到。

檢測原理

膠體金是由氯金酸(HAuCl4)在還原劑如白磷、抗壞血酸、枸櫞酸鈉、鞣酸等作用下，可聚合成定大小的金顆粒，并由于靜電作用成為種穩(wěn)定的膠體狀態(tài)，形成帶負電的疏水膠溶液，由于靜電作用而成為穩(wěn)定的膠體狀態(tài)，故稱膠體金。膠體金在弱堿環(huán)境下帶負電荷，可與蛋白質(zhì)分子的正電荷基團形成牢固的結合，由于這種結合是靜電結合，所以不影響蛋白質(zhì)的生物性。

膠體金除了與蛋白質(zhì)結合以外，還可以與許多其它生物大分子結合，如SPA、PHA、ConA等。根據(jù)膠體金的些物理性狀，如電子密度、顆粒大小、形狀及顏色反應，加上結合物的免疫和生物學性，因而使膠體金廣泛地應用于免疫學、組織學、病理學和細胞生物學等域。

膠體金標記，實質(zhì)上是蛋白質(zhì)等分子被吸附到膠體金顆粒表面的包被過程。吸附機理可能是膠體金顆粒表面負電荷，與蛋白質(zhì)的正電荷基團因靜電吸附而形成牢固結合。用還原法可以方便地從氯金酸制備各種不同粒徑、也就是不同顏色的膠體金顆粒。這種形的粒子對蛋白質(zhì)有很強的吸附能，可以與葡萄菌A蛋白、免疫蛋白、毒素、糖蛋白、酶、抗生素、激素、牛血清白蛋白多肽綴合物等非共價結合，因而在基礎研究和臨床實驗中成為非常有用的具。

免疫金標記(Immunogold labelling techique) 主要利用了金顆粒具有電子密度的性，在金標蛋白結合處，在顯微鏡下可見黑褐色顆粒，當這些標記物在相應的配體處大量聚集時，肉眼可見紅色或粉紅色斑點，因而用于定性或半定量的快速免疫檢測方法中，這反應也可以通過銀顆粒的沉積被放大，稱之為免疫金銀染色。

常用檢測

免疫膠體金光鏡染色法

細胞懸液涂片或組織切片，可用膠體金標記的抗體行染色，也可在膠體金標記的基礎上，以銀顯影液增強標記，使被還原的銀原子沉積于已標記的金顆粒表面，可明顯增強膠體金標記的敏感性。

免疫膠體金電鏡染色法

可用膠體金標記的抗體或抗抗體與負染病毒樣本或組織薄切片結合，然后行負染。可用于病毒形態(tài)的觀察和病毒檢測。

斑點免疫金滲濾法

應用微孔濾膜(如膜)作載體，將抗原或抗體點于膜上，封閉后加待檢樣本，洗滌后用膠體金標記的抗體檢測相應的抗原或抗體。

膠體金免疫層析法

將異性的抗原或抗體以條帶狀固定在膜上，膠體金標記試劑(抗體或單克隆抗體)吸附在結合墊上，當待檢樣本加到試紙條端的樣本墊上后，通過毛細作用向前移動，溶解結合墊上的膠體金標記試劑后相互反應，再移動至固定的抗原或抗體的區(qū)域時，待檢物與金標試劑的結合物又與之發(fā)生異性結合而被截留，聚集在檢測帶上，可通過肉眼觀察到顯色結果。該法現(xiàn)已發(fā)展成為診斷試紙條，使用十分方便。

快速金標試劑

是將異的抗體固定于酸類纖維素膜的某區(qū)帶，當該干燥的酸類纖維素端浸入樣品(尿液或血清)后，由于毛細管作用，樣品將沿著該膜向前移動，當移動至固定有抗體的區(qū)域時，樣品中相應的抗原即與該抗體發(fā)生異性結合。同時利用金粒具有電子密度的性，在金標蛋白結合處。當這些標記物在相應的配體處大量聚集時，肉眼可見紅色的斑點。既為快速的金標檢測方法原理。快速而試劑，要點在于所采用的單克隆抗體、多元克隆抗體、抗原、半抗原、蛋白嵌合物及膠體金等原料的靈敏性及異性等是否能達到較的標準，此為金標試劑的質(zhì)量之重要的標準。